丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料促进皮肤创面愈合的(3)
苏木精-伊红染色:将上述载玻片置于二甲苯溶液中浸没6 min,更换二甲苯溶液后再浸没6 min。随后将载玻片依次置于体积分数95%,80%,70%乙醇溶液中浸没1 min,然后用蒸馏水流水冲洗上述载玻片1 min。将载玻片放入苏木精染液中染色8 min,用蒸馏水流水冲洗2 min后将水分甩干。将载玻片置于1%盐酸乙醇溶液分色6 s,随后用蒸馏水流水冲洗8 min并将水分甩干。再将载玻片置于体积分数80%乙醇溶液中浸没1 min。将上述载玻片放入伊红水溶液中染色1 min。随后将上述载玻片依次浸没于体积分数80%,95%,100%乙醇溶液中各2 min使其脱水透明。最后使用甘油封固,在显微镜下观察组织切片。
1.5 主要观察指标 丝素蛋白/姜黄素复合膜的力学性能、透光率、抗菌性能及创面修复效果。
1.6 统计学分析 实验所采用的数据均为3次平行测试后所得结果的平均值。数据采用Origin 8.0软件系统分析处理,数据采用t检验,以P< 0.05为差异有显著性意义,P< 0.01为差异有非常显著性意义。
2 结果 Results
2.1 丝素蛋白/姜黄素复合膜的的宏观形貌 丝素蛋白/姜黄素复合膜的平均厚度为(22.) μm。图2a为丝素蛋白/姜黄素复合膜的宏观形貌图,呈橙黄色,透过丝素蛋白/姜黄素复合膜可清晰看到纸上打印的“SWU”样字符,这表明丝素蛋白/姜黄素复合膜有良好的透明度。图2b显示丝素蛋白/姜黄素复合膜具有一定的柔韧性,在弯折约90°时不会发生断裂,这表明丝素蛋白/姜黄素复合膜柔软且具有一定力学强度,适合作为皮肤创伤敷贴。
2.2 丝素蛋白/姜黄素复合膜的力学性能 丝素蛋白膜与丝素蛋白/姜黄素复合膜的断裂强度和杨氏弹性模量如图3所示。丝素蛋白/姜黄素复合膜的断裂强度为(45.) N/mm2,显著高于丝素蛋白膜(18.) N/mm2(P< 0.05);丝素蛋白/姜黄素复合膜的杨氏弹性模量为(0.) MPa,显著低于丝素蛋白膜 (0.) MPa(P< 0.01)。
2.3 丝素蛋白/姜黄素复合膜的透光率 图4为丝素蛋白膜和丝素蛋白/姜黄素复合膜的紫外-可见-近红外透射光谱曲线,丝素蛋白膜和丝素蛋白/姜黄素复合膜均具有优良的透光性,但丝素蛋白/姜黄素复合膜在波长320-530 nm范围内表现出较强的吸收。
2.4 丝素蛋白/姜黄素复合膜的光敏抑菌性能 涂布平板法检测结果显示,光照组琼脂平板上的菌落数最少,其次是避光组,最后为空白组,见图5。实验结果表明避光条件下,丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料展现出抑菌效果;当给予丝素蛋白/姜黄素复合膜405 nm UV LED光照时,丝素蛋白/姜黄素复合膜对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌活性进一步增强。图6为各组代表性涂布平板法抗菌实验检测结果。
2.5 丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料创面疗效观察
2.5.1 创面愈合率 各组小鼠不同时间点创面大体观见图7。术后第3天,实验组创面与丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料紧密贴合,创面处无渗出液积累,且创面已经开始缩小;对照组创面处还有少许渗出液且有出血现象,创面愈合率低于实验组(P< 0.05)。术后第7天,实验组创面明显缩小,伤口结痂;对照组创面开始缩小,创面愈合率低于实验组(P< 0.05)。术后第14天,实验组创面表面平滑而光亮,表明创面已基本愈合,但创面中心处仍有褐色印记;对照组创面中心仍有内陷,且内陷区域表面伴有少量结痂,创面愈合率低于实验组(P< 0.05)。两组不同时间点创面愈合率见图8。
实验发现,最初使用丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料处理小鼠背部皮肤缺损创面时,丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料紧紧贴合在创面上,随着小鼠皮肤缺损创面的逐渐愈合,丝素蛋白/姜黄素复合膜敷料也逐渐从创面脱落。
2.5.2 组织切片结果分析 图9为两组术后不同时间点的创面组织形态学观察。术后第3天,两组创面区域均有上皮化现象,均有肉芽组织形成,实验组再生上皮长度、肉芽组织厚大于对照组。术后第7天,两组再生上皮长度、肉芽组织厚度均增加,实验组的再生上皮长度、肉芽组织厚度仍大于对照组。术后第14天,两组创面区域均全部上皮化,实验组创面愈合区域皮下毛囊发育已经基本完成,可见大量胶原纤维及成纤维细胞整齐排列,为成熟的纤维结缔组织;对照组小鼠皮肤缺损创面附近未发现有纤维结缔组织的形,对照组小鼠背部创面愈合区域皮下毛囊则未全部长出,见图10。两组术后不同时间点的再生上皮长度、肉芽组织厚见图11。
3 讨论 Discussion
图 1|小鼠皮肤全层缺损模型的建立Figure 1 |Preparation of a mouse model of full-thickness skin defect图注:根据小鼠背部皮肤全层缺损模型构建后所贴材料不同分为了实验组和对照组,实验组所采用材料为无菌丝素蛋白/姜黄素复合膜;对照组所采用材料为无菌纱布
文章来源:《材料研究学报》 网址: http://www.clyjxbzz.cn/qikandaodu/2021/0213/588.html
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